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Aislamientos urogenitales de Candida albicans (CA) resistentes a los azoles (AZ) en estado planctónico y su comportamiento in vitro en la formación de biopelículas (BP)

Trabajos y Proyectos

Aislamientos urogenitales de Candida albicans (CA) resistentes a los azoles (AZ) en estado  planctónico y su comportamiento in vitro en la formación de biopelículas (BP)

SOGIBA

Farinati Alicia, Arcos Marisa, Sibert Leticia, Marqués Melina, Gabriela santiso

 CA es la levadura más común en las infecciones relacionadas a BP en superficies abióticas. Nosotros las hemos demostrado en la vagina integrando la microbiota normal y en las candidiasis vaginales. Se conoce que CA, como otros microorganismos, cuando están en las BP se asocian significativamente con una elevada resistencia a antimicrobianos (AM) comparada con sus formas planctónicas (PL). No se ha investigado en profundidad qué ocurre con PL de CA previamente resistentes. Por otro lado se ha incrementado el uso de azoles (AZ) en  pacientes sometidos a terapia intensiva con AM que es un riesgo para la selección de especies resistentes ya sea naturales o no a los mismos. La formación de BP podría  ser crítica en el desarrollo de procesos crónicos en el tracto genital inferior femenino  (TGIF) y dificultar la erradicación de CA. El objetivo de nuestro trabajo fue estudiar el comportamiento en la formación de BP de formas planctónicas de aislamientos urogenitales de CA con multirresistencia (MR) a los AZ (CAMR). La sensibilidad a los AZ fue determinada de acuerdo a las normas del Control Laboratory Standards Institute (CLSI). Usamos 20 aislamientos de CA sensibles (S) (CAS): fluconazol (FCZ) CIM ≤ 2μg/ml; itraconazol (ITZ) <1μg/ml; voriconazol (VCZ) ≤0.125μg/ml y 5 CA MR con CIM superiores a 8μg/ml. Estudiamos 1 CAMR recuperada de catéter como control FCZ >256μg/ml; ITZ >32μg/ml; VCZ >32μg/ml. Todos los aislamientos fueron incubados 24-48h en caldo Sabouraud (CS). La BP de dada aislamiento de CA se investigó usando dispositivos de vidrio (DV); DV con una capa de células vaginales (descrito en trabajos previos) y película o film de acetato. Cada uno de ellos fue dispuesto en el CS (2 por aislamiento) y luego de 24-48 horas de incubación, se lavaron, colorearon con cristal violeta (CV) y con naranja de acridina (NA) y se leyeron con microscopio óptico y de fluorescencia. Usamos microplacas (MP) para estudios cuantitativos en la formación de las BP. Después de 24 horas de incubación se tiñeron con CV y se leyeron con un microprocesador RT-2100 (absorbancia λ 450nm). La BP fue detectada en todos los aislamientos con diferente constitución pero el exopolisacárido,  evidenciado notoriamente con el NA, fue más exuberante en CAMR que en CAS. Usualmente la BP con blastosporos, hifas y EPS estuvo presente en CAMR y sólo en algunas de las BP de CS. La sensibilidad de CA a los AZ previa a su constitución como BP es importante no sólo por la resistencia en si (eventualmente soslayable con mayores dosis) sino también debido a la intensidad de su BP como factor de virulencia y la posibilidad del progreso hacia una condición crónica.


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